Metoda Bradford

Metoda Bradford (cunoscută și sub numele de metoda Coomassie) a fost dezvoltată de Marion M. Bradford în 1976.[1] Este o procedură analitică spectroscopică rapidă și precisă,[2] fiind utilizată pentru a măsura concentrația proteinelor într-o soluție. Reacția este dependentă de compoziția în aminoacizi a proteinelor măsurate.

Structura Coomassie Brilliant Blue G-250, care este reactivul de colorație în metoda Bradford
Reacția de culoare dintre proteine și reactivul Bradford

Principiu

Metoda se bazează pe schimbarea colorației cu reactivul Coomassie Brilliant Blue G-250 în prezența proteinelor, ceea ce este detectabil prin spectrofotometrie (este astfel o metodă colorimetrică). Colorantul Coomassie există în trei forme: anionică (albastră), neutră (verde) și cationică (roșie).[3] În condiții acide, forma roșie a colorantului se transformă în forma sa albastră, prin legarea de proteina din soluția de testat. Dacă nu există nicio proteină care să se lege, atunci soluția va rămâne brună-maro. Colorantul formează un complex puternic, non-covalent, cu gruparea carboxil a proteinei, prin intermediul forțelor van der Waals și cu gruparea amino prin interacțiuni electrostatice.[1]

Note
  1. Ninfa, Alexander J; Ballou, David P; Benore, Marilee (). Fundamental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology. Wiley. p. 113.
  2. Bradford, Marion (). „A Rapid and Sensitive Method for the Quantification of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding” (PDF). Analytical Biochemistry. 72 (1–2): 248–254. doi:10.1006/abio.1976.9999. PMID 942051 – via Google Scholar.
  3. „Quick Start TM Bradford Protein Assay” (PDF). www.bio-rad.com.

Vezi și
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.